祿米-PCR移動核酸檢測實驗室案例剖析

一、PCR實驗室概況：

實驗室面積：100平米

承制單位：廣州祿米實驗室設備科技有限公司

二、實驗室活動內容：

核酸檢測;

國家要求按照第二類病原微生物進行管理。病毒培養、動物感染實驗應在生物安全三級及以上實驗室開展;未經培養的感染性材料的操作應在生物安全二級實驗室進行，同時采用生物安全三級實驗室的個人防護;滅活材料的操作應在生物安全二級實驗室進行。病毒核酸檢測應當在生物安全二級實驗室進行，同時采用生物安全三級實驗室的個人防護。

三、平面布局

四、工作流程

試劑準備---樣本準備---擴增及產物分析

試劑準備區：

PCR實驗室中為“潔凈”的區域，不應有任何核酸的存在，包括試劑中所帶的標準品和陽性對照。

所有實驗用潔凈物品如離心管、吸頭等的存放和準備處。

商品試劑盒：75%乙醇、焦碳酸二乙酯(DEPC)處理水、NaOH等可能需要自配

自制試劑：一次較大量配制，然后分裝成小瓶保存，每次檢測時，取出一小瓶使用，未用完的即棄掉，不再使用。

儀器設備主要有加樣器、天平、離心機和冰箱。

標本制備區：

儀器設備主要有生物安全柜、超凈臺、加樣器、高速臺式(冷凍)離心機、加熱模塊或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不應放在實驗室門口等易受人員走動影響的地方，也不應直對分體式空調。

主要是用于核酸樣本的提取，標本的制備應在生物安全柜內進行，可防止標本氣溶膠的擴散。

加樣器吸頭須帶濾芯。

使用加熱模塊時，如在模塊孔中填入二氧化硅細砂，然后將標本管置于細砂中溫育，可得到較為一致的溫育溫度。

擴增和產物分析區：

擴增反應體系的配制和提取核酸的加入，可在標本制備區也可在本區內進行，

加樣時，先加提取的核酸模板樣本，每加完一個即蓋好蓋子，然后加陽性質控核酸模板，再就是標本制備陰性質控和僅含按樣本一樣稀釋的主反應混合液的擴增陰性質控，這樣做的目的是，較大可能地測出以前擴增產物的交叉污染。

產物分析區是臨床基因擴增檢驗的后一個工作區域，也是需要打開擴增后反應管進行擴增產物分析檢測的地方。是PCR實驗室“不潔凈”的區域。

儀器設備有、熒光定量PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統、測序儀、(酶標儀和洗板機)、核酸雜交儀、恒溫設備等。

五、環境控制

1、實驗室采用全新風全排風的系統，根據客戶需求配置直膨機或普通空調系統，其換氣次數大于15次/小時，，室內溫度為18~26度，濕度小于75%，噪音<60dB(A);

2、室內壓力為整體負壓，單向氣流;送排風形式為上送，下回。

3、氣流組織示意如下：

4、壓差自控控制系統

壓差值：

試劑準備緩沖間 +10pa

試劑準備間 +15pa

標本制備間緩沖 +5pa

標本制備間 -5pa

擴增及產物分析緩沖-5pa

擴增及產物分析 -15pa

以上壓差自控調節。

六、三廢處理

1、廢氣排放：高效過濾排風系統采用《 高效空氣過濾器》GB13554

2、廢水排放：經過污水處理設備廢水排放符合《水污染綜合排放標準DB11-307-2013>

3、醫療固廢：獨立污物傳遞窗傳至室外，第三方具有醫療廢物回收資質公司回收處理。

七、設計依據

• 《病毒感染的肺炎實驗室檢測技術指南》

• 《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法2010》

• 《GB 50346-2011 生物安全實驗室建筑技術規范》

• 《GB19489-2008實驗室生物安全通用要求》

• 《GB50849-2014：傳染病醫院建筑設計規范》

• 《T/CECS662-2020醫學生物安全二級實驗室建設技術標準》

• 《GB/T35428-2017：醫院負壓隔離病房環境控制要求》

• 《WS 233-2002微生物和生物醫學實驗室生物安全通用準則》

• 《病毒感染的肺炎實驗室檢測技術指南》

• 《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法2010》

• 《GB 50346-2011 生物安全實驗室建筑技術規范》

• 《GB19489-2008實驗室生物安全通用要求》

• 《GB50849-2014：傳染病醫院建筑設計規范》

• 《T/CECS662-2020醫學生物安全二級實驗室建設技術標準》

• 《GB/T35428-2017：醫院負壓隔離病房環境控制要求》

• 《WS 233-2002微生物和生物醫學實驗室生物安全通用準則》